摘要：目的 探讨微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）Iowa Ⅱ株亲环素（CyPs）家族蛋白与微小隐孢子虫感染、致病、生存及与宿主免疫调控之间的关系。方法利用生物信息学工具,获取微小隐孢子虫Iowa Ⅱ株Cy Ps家族蛋白的序列信息,然后进行结构域预测、重要氨基酸位点的分析、motif搜索、蛋白的理化性质分析、信号肽预测和跨膜区预测,最后对不同物种的CyPs进行多重比对与进化树分析,并结合Blast-P同源比对和文献分析结果进行C.parvum Iowa Ⅱ株CyPs家族蛋白的功能预测。结果搜索到了C.parvum基因组中7个含有cyclophilin superfamily典型结构域的CyPs编码基因,分别是cgd1_870、cgd2_1660、cgd2_4120、cgd5_3350、cgd7_520、cgd8_1560和cgd8_2350。通过功能预测发现,cgd1_870的N端含有信号肽,是一个典型的分泌型肽酰脯氨酸顺反异构酶（PPIase）,很有可能是隐孢子虫和宿主相互作用的重要分子基础;cgd2_1660属于Cyclophilin_PPIL3_like亚家族,缺乏环孢菌素A（CsA）结合需要的关键氨基酸残基,无法结合CsA发挥免疫抑制作用;cgd2_4120属于cyclophilin_ABH_like亚家族,且含有CsA_PPIase_1 motif,在隐孢子虫细胞内可以作为CsA的胞内受体发挥着对隐孢子虫的免疫抑制作用;cgd7_520不仅具有CyPs家族的典型功能而且还具有WD40家族蛋白的相关功能,可能在隐孢子虫的生存过程中发挥着重要的作用;cgd8_2350还含有一个RRM结构域,不仅具备亲环素家族典型的PPIase活性,并且能够结合核酸参与基因表达过程的各种RNA加工过程,是一个对基因转录后水平有重要影响的蛋白。结论隐孢子虫基因组中存在7种CyPs的编码基因,其特征与功能均存在异同,其中cgd1_870具有分泌型的信号肽,是一个分泌性蛋白。

摘要：目的 观察酸性成纤维细胞生长因子（FGF-1）和miR-133a在HEI-OC1耳蜗毛细胞氧化凋亡过程中的表达,探讨miR-133a对FGF-1的调控机制及其在毛细胞氧化损伤过程中的作用。方法 应用叔丁基过氧化氢（t-BHP）致耳蜗毛细胞氧化损伤细胞模型模拟毛细胞受到噪声刺激后的氧化损伤过程,设50、100、200μmol/L三个染毒组和未染毒对照组。提取细胞总RNA和总蛋白,采用qRT-PCR以及Western blot检测miR-133a和FGF-1表达水平,检索生物信息学网站,对FGF-1 3’-UTR区上miR-133a可能作用的靶序列进行预测分析;脂质体转染miR-133amimics入耳蜗毛细胞内,采用q RT-PCR和Western blot分别检测转染后FGF-1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 qRT-PCR结果显示,t-BHP处理组FGF-1 mRNA的表达为对照组1.32倍（P〈0.05）、1.67倍（P〈0.05）和2.64倍（P〈0.001）,且随着染毒浓度的升高呈增加的趋势（F=9.231,P〈0.05）;同时miR-133a表达均有所降低,分别为对照组的0.81倍（P〈0.05）、0.68倍（P〈0.05）和0.37倍（P〈0.05）,且随着染毒浓度的升高呈降低的趋势（F=17.63,P〈0.05）。脂质体转染miR-133a mimics,50、100、200μmol/L的转染组miR-133a表达分别为对照组的767、1 499和1 607倍,差异有统计学意义（P〈0.05）。miR-133a mimics转染组FGF-1的mRNA和蛋白表达水平均低于对照组,同时miR-133a inhibitors转染组FGF-1的mRNA和蛋白表达水平均高于对照组。软件预测结果显示,在多个物种中靶序列（FGF1-3′UTR上第356-363位核苷酸）在物种之间十分保守,其种子区域完全互补。结论 FGF-1的表达受miR-133a的调控,FGF-1基因的356-363碱基区域可能为miR-133a的识别元件。

摘要：目的 探讨髓过氧化物酶（MPO）和醌氧化还原酶（NQO1）基因多态性及其交互作用与儿童急性白血病易感性的关系。方法 146名广东籍儿童急性白血病患者纳入病例组,172名健康体检者为对照组。采用巢式PCR检测MPO、NQO1基因型。采用χ2检验比较各基因型频率在病例组与对照组之间的差异,用比值比（OR）及其95%可信区间（CI）表示各基因型发生急性白血病的危险度。结果 病例组MPO-463位点A突变基因比例为15.8%,携带MPO-463位点A突变基因型（G/A和A/A）个体发生急性白血病的危险性是携带G/G（野生型）个体的0.589倍。（OR=0.589,95%CI：0.368-0.944）,P=0.028）;病例组NQO1-609位点T突变基因比例为45.5%,携带NQO1-609位点T突变基因型（C/T＋T/T）病例组和对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。同时携带不同MPO-463、NQO1-609基因型组合与MPO和NQO1的野生型比较,病例组和对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 携带MPO野生型（GG）个体发生急性白血病的风险增大,可考虑作为儿童急性白血病易感性的重要生物标志物,未发现NQO1-609位点T突变基因与白血病发生的相关性。

摘要：目的 观察饱和游离脂肪酸（软脂酸,PA）对HepG2细胞脂质沉积的影响和固醇调节元件结合蛋白1c（Srebp1c）甲基化调控机制。方法 体外培养人肝癌细胞系HepG2细胞,对照组不作处理,软酯酸（PA）组用0.2mmol/L的PA刺激细胞。采用油红O染色检测HepG2细胞内脂质沉积情况;qPCR和Western blot分别测定细胞内基因和蛋白表达;甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测HepG2细胞Srebp1c甲基化状态。结果 0.2 mmol/L的PA刺激能使HepG2细胞发生脂质沉积。与对照组比较,PA组HepG2细胞Srebp1c（P=0.004 6）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）（P=0.023 0）和脂肪酸合酶（FAS）（P=0.012 5）的mRNA表达均异常升高,Srebp1c蛋白表达升高（P〈0.05）,Srebp1c启动子甲基化水平降低（P=0.0253）。结论 游离脂肪酸可以导致HepG2细胞脂质沉积性损伤,Srebp1c甲基化程度降低可能是重要原因。

摘要：目的 探讨2型糖尿病患者血糖水平和血清Klotho表达的相关性研究及甲基化机制。方法 选择本院肾病内分泌科确诊为2型糖尿病的患者56例为观察组,另选42名健康成年人作对照组,分别采集血清。qPCR和Western-blot检测血清Klotho蛋白的表达。甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测Klotho甲基化状态。结果 相对于对照组,2型糖尿病组血清Klotho mRNA表达（t=7.162,P〈0.000 1）和蛋白表达（t=17.56,P〈0.000 1）均明显降低,差异有统计学意义。在糖尿病患者中,Klotho蛋白表达与空腹血糖值（R2=0.094 2,P=0.021 4）和餐后2 h血糖值（R2=0.097 5,P=0.019 1）均呈明显负相关。2型糖尿病组Klotho甲基化水平较对照组升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Klotho启动子甲基化在2型糖尿病的病理进程中扮演着重要角色。